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2023熒光蛋白激發(fā)觀測(cè)的新方法

更新時(shí)間:2023-04-24   點(diǎn)擊次數(shù):801次

綠色熒光蛋白激發(fā)觀察方法

隨著時(shí)代科技發(fā)展進(jìn)步,觀察熒光蛋白的技術(shù)也越來越便捷,傳統(tǒng)的熒光顯微鏡觀測(cè)熒光蛋白有很多局限性,美國路陽生產(chǎn)的便攜式熒光蛋白激發(fā)觀測(cè)燈給轉(zhuǎn)基因研究工作者帶來了便捷性,無需取樣,打開觀測(cè)燈直接照射熒光蛋白,肉眼就能清晰看到熒光蛋白在葉片、愈傷、種子、菌落等載體上的表達(dá)。無論是綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白或紅色熒光蛋白,一臺(tái)觀測(cè)燈就能直接觀測(cè)2種熒光蛋白的表達(dá)。現(xiàn)工程師針對(duì)綠色熒光蛋白的觀測(cè)原理、幾種觀測(cè)方法介紹如下


綠色熒光蛋白(GFP):

綠色熒光蛋白(GFP),是一個(gè)由約238個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),從藍(lán)光到紫外線都能使其激發(fā),發(fā)出綠色螢光,在細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)中,綠色螢光蛋白(GFP)基因常用做報(bào)告基因。綠色螢光蛋白基因也可以克隆到脊椎動(dòng)物(例如:兔子)上進(jìn)行表現(xiàn),并拿來映證某種假設(shè)的實(shí)驗(yàn)方法。通過基因工程技術(shù),綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉(zhuǎn)進(jìn)不同物種的基因組,在后代中持續(xù)表達(dá)?,F(xiàn)在,綠色螢光蛋白(GFP)基因已被導(dǎo)入并表達(dá)在許多物種,包括細(xì)菌,酵母和其他真菌,魚(例如斑馬魚),植物,蒼蠅,甚至人等哺乳動(dòng)物的細(xì)胞。

GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),并有一個(gè)峰值為470nm的副吸收峰(藍(lán)光);發(fā)射光譜峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側(cè)峰。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發(fā)光對(duì)細(xì)胞的傷害小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下,GFP抗光漂白能力比熒光素強(qiáng),特別是在450~490nm藍(lán)光波長下穩(wěn)定。類似的,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠(yuǎn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高,抗光漂白能力強(qiáng),因此適用于定量測(cè)定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報(bào)告蛋白,其作用是任何其它酶類報(bào)告蛋白比不上的。但因?yàn)镚FP不是酶,熒光信號(hào)沒有酶學(xué)放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報(bào)告蛋白,比如螢火蟲熒光素酶等。

由于熒光蛋白能穩(wěn)定在后代遺傳,并且能根據(jù)啟動(dòng)子特異性地表達(dá),在需要定量或其他實(shí)驗(yàn)中慢慢取代了傳統(tǒng)的化學(xué)染料。更多地,熒光蛋白被改造成了不同的新工具,既提供了解決問題的新思路,也可能帶來更多有價(jià)值的新問題。

綠色熒光蛋白的激發(fā)觀察方法

1. 紫外光源
采用LUYOR-3410UV便攜式紫外光源(又叫高強(qiáng)度紫外線燈、黑光燈)觀察也非常方便,但如果觀察植物,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會(huì)發(fā)出熒光,對(duì)gfp發(fā)出的熒光也會(huì)產(chǎn)生干擾,另外,標(biāo)本長時(shí)間在紫外光源照射下對(duì)GFP標(biāo)本組織也會(huì)造成破壞。

便攜式GFP激發(fā)光源
采用LUYOR-3415RG便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測(cè)鏡、熒光蛋白激發(fā)觀測(cè)燈)是便捷、方便的觀察方法,因GFP在470nm有一個(gè)很高的吸收峰,采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光,在觀察gfp熒光時(shí),因?yàn)榧ぐl(fā)光為強(qiáng)烈的藍(lán)色光線,佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號(hào)。

GFP煙草表達(dá)效果圖.jpg


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